近期,澳门现金网,澳客彩票网医学技术学院/广东省医学免疫与分子诊断重点实验室陈章权教授团队在分析化学领域权威期刊《Analytical Chemistry》发表了题为“One Pot CRISPR/Cas12a Assay Based on Ultrashort HDA for Ultrasensitive and Universal Nucleic Acid Detection”的研究论文,该研究新开发了一种命名为“一锅法usHDA-CRISPR/Cas12a”核酸检测平台。
恒温扩增是在恒定温度下扩增核酸的分子生物学技术,无需特殊仪器设备,简便易行。解旋酶依赖扩增(HDA)是一种原理接近PCR的恒温扩增技术,通过解旋酶替代变温,在恒温条件下打开DNA双链,无需热变性,是POCT的优选,但是传统的HDA扩增时间长、灵敏度低、假阳性问题突出。
为解决以上挑战,本研究创新性地提出了“超短HDA(usHDA)”概念,提出并验证了“提高解旋酶与核酸模板的摩尔比,提高解旋酶的解旋效率,从而提高扩增效率”的科学假设。本研究用usHDA快速扩增含crRNA识别区的超短靶标片段,适配后续CRISPR/Cas12a检测,克服了传统HDA非特异性反应,解决了传统HDA易出现假阳性的问题。通过构建一锅法usHDA-CRISPR/Cas12a检测平台用于核酸检测,实现了“快速扩增 + 高特异性检测”,解决了传统HDA技术的核心痛点。该检测平台在37℃ 的单一温度条件下恒温反应,扩增仅需30分钟,全程检测1小时内完成,灵敏度达5 aM,具有快速、超敏、高特异等优点。该研究创新性提出了usHDA概念,成功开发了一锅法usHDA-CRISPR/Cas12a的核酸检测平台,为核酸的快速检测提供了新策略。